L’identification précoce des interactions médicamenteuses potentielles est essentielle au développement sécuritaire d’un candidat médicament. Notre plateforme offre des essais sur mesure pour évaluer l’inhibition des enzymes métaboliques (CYP450) ainsi que celle des transporteurs d’efflux comme la P-glycoprotéine (P-gp), à l’aide de systèmes cellulaires ou microsomaux validés. Ces tests permettent de déterminer les IC₅₀, d’identifier les inhibiteurs irréversibles et de confirmer l’implication de transporteurs spécifiques dans la pharmacocinétique des composés.
Inhibition compétitive des CYP450 (réversible)
Conditions : Incubation du composé à 9 concentrations (2,2 nM à 15 µM) avec des microsomes hépatiques humains (0,25–0,5 mg/mL selon l’isoforme), en présence de NADPH et d’un substrat spécifique à chaque isoforme.
Isoformes testées : CYP1A2, CYP2C9, CYP2D6, CYP3A4, (CYP2C19 sur demande)
Substrats et contrôles utilisés :
CYP1A2 : Phénacétine (100 µM) – contrôle : α-naphthoflavone
CYP2C9 : Diclofénac (10 µM) – contrôle : miconazole
CYP2D6 : Dextrométhorphane (15 µM) – contrôle : quinidine
CYP3A4 : Testostérone (50 µM) – contrôle : kétoconazole
CYP2C19 : S-mephénytoïne (10 µM) – contrôle : S-benzylnirvanol
Résultats : IC₅₀ déterminée pour chaque isoforme à partir des courbes dose-réponse
Inhibition des CYP450 dépendante du temps (irréversible)
Conditions : Test focalisé sur l’isoforme CYP3A4, avec incubation du composé à 9 concentrations (2,2 nM à 15 µM) dans des microsomes hépatiques humains (0,25–0,5 mg/mL) avec un substrat spécifique, après une pré-incubation de 30 minutes avec ou sans NADPH.
Contrôle : Mifépristone
Résultats : Déplacement de l’IC₅₀ (IC₅₀ shift), indiquant une inhibition irréversible du CYP3A4
Inhibition de la P-glycoprotéine (P-gp)
Conditions : Utilisation de cellules MDCK-II surexprimant MDR1, cultivées sur inserts poreux (plaque 24 puits). Le transport bidirectionnel (apical ↔ basolatéral) d’un substrat (digoxine ou loperamide) est mesuré en présence ou absence du composé testé (0 à 100 µM), sur 60 minutes.
Contrôles :
Cyclosporine A : inhibiteur de la P-gp
MDCK-II WT : cellule témoin négative
Résultats : Coefficient de perméabilité Papp, ratio d’efflux, IC₅₀ par régression